化妆品中氢化可的松等7种禁用物质的检测方法
2012年12月14日 发布

  1 适用范围
  本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中7种禁用物质:米诺地尔(CAS:38304-91-5)、氢化可的松(CAS:50-23-7)、螺内酯(CAS:52-01-7),雌酮(CAS:53-16-7)、坎利酮(CAS:976-71-6)、醋酸曲安奈德(CAS:3870-07-3)、黄体酮(CAS:57-83-0)的方法。
  本方法适用化妆品中禁用物质:米诺地尔、氢化可的松、螺内酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黄体酮含量的测定。

  2 方法提要
  样品经过提取后,用液相色谱-串联质谱法测定,以多反应离子监测模式进行监测,采用特征离子丰度比进行定性,待测化合物峰面积定量,以标准曲线法计算含量。本方法的检出限、定量限和取样品1 g时的检出浓度、定量浓度见表1.

                              表1 各违禁成分的检出限和检出浓度

化合物

检出限(ng/mL

定量限(ng/mL

检出浓度(ng/g)

定量浓度(ng/g)

米诺地尔

0.2

0.5

2

5

氢化可的松

1

2

10

20

螺内酯

1

2

10

20

雌酮

5

10

50

100

坎利酮

1

2

10

20

醋酸曲安奈德

0.2

0.5

2

5

黄体酮

0.5

1

5

10

  3 试剂和材料
  除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为去离子水。
  3.1 乙腈,色谱纯。
  3.2 甲醇,色谱纯。
  3.3 乙腈溶液[φ(乙腈)= 90%]:量取10 mL水于100 mL量瓶中,加乙腈(3.1)稀释至刻度,混匀。
  3.4 米诺地尔、氢化可的松、螺内酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黄体酮对照品,由中国食品药品检定研究院提供。
  3.5 混合标准储备溶液[r(待测成分)= 1 mg/mL]:精密称取米诺地尔、氢化可的松、螺内酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黄体酮对照品10 mg(精确至0. 1 mg)置于同一10 mL量瓶中,加甲醇(3.2)使溶解并定容至刻度,摇匀,即得质量浓度为1 mg/mL的混合标准储备溶液。
  3.6 系列浓度标准溶液:用90%乙腈(3.5)稀释混合标准储备溶液,精密配制得质量浓度为10、20、50、100、200、500、1000、1500 ng/mL的系列浓度标准溶液。

  4 仪器
  4.1 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。
  4.2 分析天平:感量0.0001 g
  4.3 分析天平:感量0.00001 g。
  4.4 超声波清洗仪。
  4.5 离心机
  4.6 涡旋混合仪

  5 测定步骤
  5.1 样品处理
  称取样品约1.0 g(精确至0.001 g),置于10 mL比色管中,加入1mL饱和氯化钠溶液,涡旋30s后加入乙腈,定容至刻度,涡旋30 s,超声提取30 min,涡旋1 min,4500 rpm离心5 min,取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后,滤液作为待测液备用。
  5.2 液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件
  5.2.1 色谱条件
  色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 (3.5 μm, 2.1*150mm),螺内酯和坎利酮两个化合物色谱峰分离度要求大于1.5。
  流动相:溶液A:0.2%甲酸水,溶液B:甲醇(含0.2%甲酸),梯度程序见表2

                                   表2 流动相的梯度程序

时间(min

溶液A%

溶液B%

0

95

5

2

75

25

4

45

55

11

20

80

18

10

90

  流速:0.3 mL/min;
  柱温:30 ℃;
  进样量:5 μL。
  5.2.2 质谱参考条件
  离子源:电喷雾离子源(ESI源);
  监测模式:正离子监测模式; 监测离子对及相关电压参数设定见表3
  喷雾压力:40 psi;
  干燥气流速:8 L/min;
  干燥气温度:325 ℃;
  毛细管电压:4000 V;
  0 ~3.5 min:不进入质谱仪分析, 3.5 ~18 min:进入质谱仪分析。

                       表3 三重四极杆离子对及相关电压参数设定表

编号

物质名称

母离子(m/z

Frag.(V)

子离子(m/z

CEV

1

米诺地尔

2100

110

193.2

10

 

 

 

110

164.1*

25

2

氢化可的松

363.1

125

327

10

 

 

 

125

121*

25

3

螺内酯

341.1

147

107.1*

35

 

 

 

165

90.9

65

4

雌酮

271.2

105

253.1*

5

 

 

 

105

132.8

22

5

坎利酮

341.1

147

107.1*

35

 

 

 

165

90.9

65

6

醋酸曲安奈德

477.1

100

457.2*

5

 

 

 

100

439.1

10

7

黄体酮

315.2

140

109

25

 

 

 

140

97*

23

*指定量离子对
  5.3 定性判定
  用液相色谱-串联质谱法对样品进行定性判定,在相同试验条件下,样品中被测禁用物质的质量色谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的质量色谱峰保留时间一致;样品色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表4规定范围,则可以判断样品中存在对应的禁用物质。

                     表
4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度(k

k≥50%

50 %> k ≥ 20 %

20 %> k ≥ 10 %

k≤ 10 %

允许的最大偏差

±20%

±25%

±30%

±50%


 5.4 定量测定
  在“5.2”项液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件下,用系列浓度标准溶液(3.6)分别进样,以禁用物质的系列浓度为横坐标,禁用物质的峰面积为纵坐标,进行线性回归,建立溶液标准曲线,其线性相关系数应 大于0.99。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样5 μL,禁用物质的峰面积代入溶液标准曲线,计算禁用物质的质量浓度,按“6 项计算”,计算样品中禁用物质的质量分数。
  5.5 平行实验
  按以上步骤操作,对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

式中:——化妆品中禁用物质的质量分数,μg /g;
   m  ——样品取样量,g;
   r  ——代入回归方程计算得到的待测样液中禁用物质的质量浓度,ng/mL;
   ——定容体积,mL;
   D —— 稀释倍数(不稀释则为1)。

  7 回收率和精密度
  多家实验室验证的平均方法回收率为90.4%~113.0%,相对标准偏差小于8.6%。

  8 色谱图

色谱峰:1.米诺地尔,2.氢化可的松,3.螺内酯,4.雌酮,5.坎利酮,6.醋酸曲安奈德,7.黄体酮